Εργαστηριακές μέθοδοι

Μέθοδοι μελέτης της λειτουργικότητας των αιμοπεταλίων και των μηχανισμών πήξης

1. Συσσώρευση αιμοπεταλίων σε διάφορους αγωνιστές (ADP, Αραχιδονικό οξύ, Κολλαγόνο, TRAP, κλπ) με τη μέθοδο οπτικής διαπερατότητας (LTA).
2. Μελέτη της αιμοπεταλιακής ενεργοποίησης με τις μεθόδους point of care, θρομβοελαστογραφία και Multiplate.
3. Παρασκευή και ενεργοποίηση πλυμένων αιμοπεταλίων.
4. Έλεγχος της αντίστασης στα αντιαιμοπεταλιακά φάρμακα με τη μέθοδο φωσφορυλίωσης της VASP με τη χρήση κυτταρομετρίας ροής.
5. Μελέτη της μεμβρανικής έκφρασης του υποδοχέα-ιντεγκρίνη αΙΙbβ3 (GPIIb/IIIa) (πρόσδεση του PAC-1-FITC), της έκφρασης της P-σελεκτίνης και του CD40L καθώς και της πρόσδεσης του ινωδογόνου με τη χρήση κυτταρομετρίας ροής.
6. Προσδιορισμός της έκκρισης αιμοπεταλιακών παραγόντων όπως TxA2, PF4, χημειοκίνες, αυξητικοί παράγοντες (με το σύστημα ανάλυσης πρωτεϊνών Bio-Plex 200).
7. Παραγωγή, καθαρισμός και χαρακτηρισμός των αιμοπεταλιακών μικροσωματιδίων (PMPs).
8. Μελέτη της προσκόλλησης των αιμοπεταλίων υπό συνθήκες ροής (shear stress) (με την πλατφόρμα Cellix).
9. Μελέτη της αλληλεπίδρασης των αιμοπεταλίων με τα CD34+ πρόδρομα κύτταρα, καθώς και με τα μονοκύτταρα, λεμφοκύτταρα, ουδετερόφιλα περιφερικού αίματος με τη χρήση κυτταρομετρίας ροής.
10. Προσδιορισμός κλασσικών παραμέτρων του καταράκτη πήξης (INR, aPTT, PT, d-dimers, κλπ) καθώς και της αντιπηκτικής αποτελεσματικότητας των νέων από του στόματος αντιπηκτικών (αναστολείς του Xa και της θρομβίνης).

Μέθοδοι μελέτης του μεταβολισμού των λιπιδίων και των λιποπρωτεϊνών

1. Προσδιορισμός κλασικών λιπιδικών παραμέτρων ορού (Ολική χοληστερόλη, LDL-χοληστερόλη, HDL-χοληστερόλη, Τριγλυκερίδια).
2. Απομόνωση λιποπρωτεϊνών VLDL, LDL, HDL με διαδοχικές υπερφυγοκεντρήσεις και χρωματογραφία συγγένειας καθώς και με FPLC.
3. Διαχωρισμός και απομόνωση λιποπρωτεϊνικών υποκλασμάτων LDL, HDL με υπερφυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνοτήτων.
4. Απομόνωση Lp(a) με υπερφυγοκέντρηση και χρωματογραφία συγγένειας.
5. Προσδιορισμός των ισομορφών της Apo(a).
6. Προσδιορισμός του φαινοτύπου της LDL (ανίχνευση των μικρών-πυκνών LDL σωματιδίων καθώς και του φαινοτύπου της HDL με ηλεκτροφόρηση βαθμίδωσης πυκνοτήτων υπό μη αποδιατακτικές συνθήκες χρησιμοποιώντας το σύστημα Lipoprint.
7. Προσδιορισμός των επιπέδων της preβ1-HDL.(Lp-PLA2).
8. Προσδιορισμός της ενεργότητας και της μάζας της λιποπρωτεϊνικής φωσφολιπάσης A2 (Lp-PLA2).
9. Προσδιορισμός των ενζύμων και των πρωτεϊνών μεταφοράς που συμμετέχουν στο μεταβολισμό των λιποπρωτεϊνών (LPL, CETP HL, LCAT)
10. Μελέτη των αντιαθηρογόνων δράσεων της HDL (προσδιορισμός της αντιοξειδωτικής δράσης της HDL, προσδιορισμός των ενεργοτήτων των ενζύμων που συνδέονται στην HDL, PON-1, LCAT, Lp-PLA2).
11. Προσδιορισμός της εκροής χοληστερόλης από μακροφάγα που υπερεκφράζουν τους υποδοχείς ABCA1, ABCG1 or SRB1, in vitro.

Μέθοδοι μελέτης του οξειδωτικού stress

1. Οξειδωτική τροποποίηση της LDL και καταγραφή της σιγμοειδούς καμπύλης οξείδωσης στα 234 nm σε φασματοφωτόμετρο microELISA.
2. Προσδιορισμός των επιπέδων της Ox-LDL των αντισωμάτων έναντι της Ox-LDL στον ορό.
3. Προσδιορισμός δεικτών οξειδωτικού stress όπως 8-ισοπροστάνια (8-epiPGF2a), καρβονύλια πρωτεϊνών, 3-νιτροτυροσίνη, 8-υδροξυγουανοσίνη, κλπ.

Μέθοδοι μελέτης ενδοθηλιακής λειτουργίας

1. Μελέτη ενδοθηλιακής λειτουργίας σε κύτταρα HUVECs με προσδιορισμό της μεμβρανικής έκφρασης του ICAM-1 με κυτταρομετρία ροής.
2. Μελέτη ενδοθηλιακής λειτουργίας σε κύτταρα HUVECs με προσδιορισμό της έκκρισης του MCP-1, της PGI2 και του vWF.
3. Απομόνωση κυττάρων OECs από αίμα ομφάλιου λώρου.